Hai domande sui Test degli Allergeni Alimentari?

I metodi più comuni utilizzati nell'industria alimentare includono gli immunoassay, come i test immunoenzimatici (ELISA) e i dispositivi a flusso laterale (LFD), poiché sono in grado di rilevare la proteina responsabile della reazione allergica. Ogni metodo ha i propri vantaggi e viene utilizzato in base al tipo di allergene e alla matrice alimentare coinvolti, nonché al tipo di risultato necessario, al tempo richiesto per ottenere il risultato o allo scopo dell'analisi, tra gli altri fattori.

Altri metodi, come la PCR (reazione a catena della polimerasi) o la cromatografia liquida, sono utilizzati per risolvere problemi e confermare risultati che potrebbero non essere chiari (o quando non è disponibile un immunoassay).

Puoi leggere di più sui diversi metodi di test per allergeni qui.

Un immunodosaggio è un test biochimico che misura la presenza o la concentrazione di una molecola tramite l'interazione tra un anticorpo e un antigene (in questo caso, l'allergene).

ELISA sta per "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay" (Test immunoenzimatico legato a enzimi) ed è una tecnica di laboratorio comune utilizzata per rilevare e quantificare sostanze come gli allergeni. I test ELISA sono sensibili e possono misurare le concentrazioni di allergeni.

Gli LFD (dispositivi a flusso laterale) sono dispositivi diagnostici semplici e rapidi, utilizzati per rilevare gli analiti target, come gli allergeni. Gli LFD sono ampiamente utilizzati per i test in loco, grazie alla loro praticità e velocità.

La PCR o Reazione a Catena della Polimerasi è un metodo utilizzato per amplificare le sequenze di DNA, consentendone il rilevamento e, in alcuni casi, la quantificazione. Nei test sugli allergeni, la PCR può rilevare le sequenze di DNA specifiche degli allergeni noti.

I risultati falsi positivi o falsi negativi sono risultati di test che indicano erroneamente la presenza (positivo) o l'assenza (negativo) di un allergene.

Un risultato falso positivo potrebbe avere un impatto economico su un produttore alimentare, poiché ciò comporta la ripetizione dei test, la conferma dei risultati, la possibilità di fermare le linee di produzione, la ripetizione delle procedure di pulizia o l'eliminazione errata di lotti di prodotto. Al contrario, un risultato falso negativo potrebbe portare a richiami di prodotti, danneggiare la reputazione del produttore, ma anche avere un impatto diretto sulla salute del consumatore.

Per questo motivo, è importante conoscere i limiti dei metodi applicati e assicurarsi che tutte le validazioni necessarie siano state eseguite.

Il LOD (Limite di Rilevamento) è la quantità minima di un allergene che può essere rilevata e distinta da un vero e proprio campione di vuoto (blank), in una matrice definita, mediante un metodo di test, ma non quantificata come valore preciso.

Il LOQ (Limite di Quantificazione) è la quantità minima di un allergene che può essere misurata quantitativamente con precisione e accuratezza accettabili.

La contaminazione incrociata è il trasferimento involontario di allergeni in un prodotto alimentare. Gli allergeni possono provenire da diverse fonti, come materie prime, altri prodotti alimentari o additivi, tra gli altri. Possono essere trasferiti in più fasi e attraverso diversi processi che avvengono non solo durante il processo di produzione (ad esempio, durante la pesatura, la miscelazione, l'imballaggio, ecc.), ma anche prima dell'introduzione delle materie prime e degli ingredienti in uno stabilimento di produzione, come la raccolta, lo stoccaggio o il trasporto.

Per scegliere il kit più adatto, è necessario considerare innanzitutto diversi aspetti che ci indicheranno il tipo di kit da selezionare: qual è la fonte effettiva di contaminazione, che tipo di campione si deve analizzare (ambientale, materie prime, prodotti finiti, liquidi, paste, ecc.), se il risultato richiesto è qualitativo o quantitativo, lo scopo dell'analisi (monitoraggio, convalide, ecc.), quanto tempo si può attendere per il risultato, quanto denaro si può investire (a seconda anche del numero di campioni necessari), ecc. Inoltre, dopo aver valutato questi aspetti, è necessario eseguire una valutazione dei possibili kit di analisi: purtroppo, non possono essere utilizzati direttamente “così come sono”. La loro idoneità per la specifica combinazione allergene/matrice di interesse deve essere verificata. Pertanto, è importante sapere se matrici simili sono già state convalidate, ed è sempre consigliato che il cliente esegua una convalida o una verifica dell'idoneità della matrice.

Sebbene l'ELISA sia ampiamente utilizzato per la rilevazione degli allergeni, presenta alcune limitazioni:

• Il trattamento degli alimenti può modificare le proteine target, influenzando l'estrazione delle proteine e anche la formazione del complesso anticorpo-proteina.
• Gli anticorpi possono presentare reattività crociata verso alcuni alimenti, limitando l'applicabilità dei metodi. Questo può essere talvolta risolto utilizzando anticorpi altamente specifici.
• L'alta specificità di un anticorpo verso una proteina dell'allergene può portare a falsi negativi, poiché la rilevabilità di tale proteina potrebbe essere compromessa, mentre altre proteine allergeniche potrebbero essere ancora presenti.
• La fonte di allergene di contaminazione negli impianti di produzione raramente corrisponde esattamente alla forma di allergene utilizzata come immunogeni o come calibratori, rendendo la quantificazione meno precisa.
• La mancanza di materiali di riferimento certificati per la maggior parte degli allergeni implica una limitazione nel confronto tra metodi diversi e nella calibrazione dei metodi.
• Alcune matrici possono presentare sfide (ad esempio, pH, alta concentrazione di sali, contenuto di polifenoli, ecc.), che richiedono la personalizzazione o l'adattamento dei metodi. Alcuni di questi problemi potrebbero non essere risolvibili.

La PCR (reazione a catena della polimerasi) amplifica piccoli frammenti di DNA per rilevare gli allergeni. È particolarmente utile per i cibi altamente lavorati, dove il DNA è più stabile delle proteine. La PCR può rilevare allergeni come il sedano, che sono difficili da identificare con gli anticorpi a causa dell'alta reattività crociata che normalmente presentano. Tuttavia, la PCR non può differenziare tra i DNA provenienti da tessuti diversi, come l'uovo o il latte e la carne di pollo o manzo corrispondente.

La spettrometria di massa offre un'alta precisione nell'identificazione di proteine e peptidi, anche se parzialmente degradati o modificati dal processo di lavorazione. È in grado di rilevare più allergeni contemporaneamente ed è molto affidabile. Tuttavia, richiede personale qualificato, un investimento iniziale significativo e tempi più lunghi per ottenere i risultati rispetto ai metodi basati su immunoassaggi. Inoltre, la LC-MS (spettrometria di massa accoppiata alla cromatografia liquida) affronta alcune delle stesse sfide dell'ELISA, come la discrepanza tra i contaminanti e i calibratori (in particolare per quanto riguarda il pattern di digestione della proteina) o gli effetti della matrice.

Non esiste un singolo metodo che possa essere considerato la soluzione migliore per tutte le situazioni. ELISA e LFD (dispositivi a flusso laterale) sono ampiamente utilizzati per la loro velocità, economicità e per la rilevazione diretta della proteina allergenica. La PCR (reazione a catena della polimerasi) è più adatta per casi specifici, come i cibi con ingredienti che presentano reattività crociata. La spettrometria di massa, sebbene più avanzata, è ancora in fase di sviluppo nel campo dei test per gli allergeni. Viene utilizzata in quei casi in cui un singolo metodo non può fornire un risultato inequivocabile.

Innanzitutto, la definizione stessa dell'analyte (sostanza da analizzare) è normalmente vaga e le normative non corrispondono alla scienza (ad esempio, "frutta a guscio" vs. frutta secca specifica vs. diverse forme di frutta secca lavorata vs. singole proteine allergeniche). Questa mancanza di definizione è una delle ragioni per cui i diversi metodi non sono comparabili, insieme alla carenza di materiali di riferimento e metodi di riferimento; i problemi di reattività crociata che possono presentare gli immunodosaggi; i requisiti di alta sensibilità imposti dalla mancanza di limiti appropriati per i livelli di allergeni nei cibi; e la versatilità delle fonti di allergeni che rende probabile che i calibratori non corrispondano agli allergeni reali presenti nello stabilimento di produzione, tra gli altri. Inoltre, la lavorazione degli alimenti può modificare le caratteristiche delle proteine allergeniche, rendendole più difficili da rilevare. Processi come reazioni chimiche accelerate dal calore, aggregazione delle proteine, formazione di emulsioni e variazioni di pH possono alterare la struttura e la solubilità delle proteine allergeniche, influenzando la loro rilevabilità con i metodi tradizionali.

Alcuni degli approcci attualmente in fase di studio includono:

• Sviluppo di materiali di riferimento
• Sviluppo di linee guida per l'uso di metodi multipli per matrici problematiche (approccio "tool-box")
• Migliore definizione degli allergeni (ad esempio, noci specifiche vs. "frutta a guscio")
• Stabilire limiti di contenuto di allergeni negli alimenti
• Sviluppo di metodi di estrazione migliorati per aumentare la solubilità delle proteine aggregate
• Creazione di nuovi set di anticorpi mirati specificamente al rilevamento degli allergeni nei cibi lavorati

Gli effetti della matrice nei test per allergeni si riferiscono all'influenza di altri componenti presenti nel campione (la "matrice") sulla precisione e affidabilità dei risultati dei test per allergeni. La matrice rappresenta sostanzialmente l'intera composizione del campione, escluso l'allergene per cui si sta effettuando il test. Gli effetti della matrice possono portare ad una maggiore variabilità, falsi positivi o falsi negativi nei risultati del test.

I campioni incurati sono quelli in cui una quantità nota di allergene alimentare viene incorporata durante la lavorazione, imitando da vicino le reali condizioni di produzione della matrice del campione. I campioni con spike, invece, prevedono l'aggiunta di una quantità nota di allergene a una matrice come ricevuta dal fornitore o dal produttore. Questa distinzione è importante perché il recupero degli allergeni può variare in modo significativo tra i campioni sostenuti e quelli spigati.

Secondo le linee guida del 2010 dell'Association of Analytical Communities (AOAC), un tasso di recupero ideale per gli allergeni nelle matrici dei campioni varia tra l'80 e il 120%. Questo intervallo tiene conto dell'efficienza sia della fase di estrazione che della procedura ELISA. Tuttavia, a causa delle difficoltà con alcune matrici e della variabilità tra campioni incurati e campioni aggiunti, i tassi di recupero tra il 50% e il 150% sono considerati accettabili, a condizione che siano coerenti.

L'"effetto hook" si riferisce a un fenomeno in cui il sovraccarico di un dispositivo di test con una concentrazione elevata di allergene porta a un risultato falso negativo. Questo effetto è più probabile che si verifichi in scenari di test specifici, come quando si testano deliberatamente allergeni puri o concentrazioni molto elevate per convalidare la funzionalità dei kit di test. Questi scenari non sono rappresentativi dei test allergenici di routine, poiché, in particolare nell'industria alimentare, le concentrazioni di allergeni nei campioni sono solitamente ben all'interno del range di rilevamento ottimale del test.

Nell'effetto hook, la quantità di allergene presente supera la capacità dell'anticorpo di rilevamento che è legato al materiale di etichettatura colorata (spesso oro colloidale o lattice colorato). Di conseguenza, l'allergene in eccesso non etichettato si sposta lungo la membrana del test più rapidamente dell'allergene etichettato con il colore, saturando tutti i siti di legame sugli anticorpi di cattura immobilizzati sulla superficie della membrana.

Come risultato, quando l'allergene etichettato con il colore arriva finalmente su questi siti, non ci sono più siti di legame disponibili. Questo fa sì che l'allergene etichettato con il colore continui a muoversi verso il tampone di assorbimento alla fine del dispositivo di test senza legarsi. Di conseguenza, l'allergene etichettato con il colore non riesce a generare la linea di test colorata che normalmente indica un risultato positivo.

Se è in atto una gestione degli allergeni, dovresti trattare con tracce e non con grandi quantità. Se gli allergeni sono un ingrediente, o se è noto che c'è un alto rischio di contaminazione, i test a striscia potrebbero non essere la scelta migliore. Dal solo risultato del test a striscia, non puoi distinguere tra un vero negativo e l'effetto hook. Quello che puoi fare è diluire il campione/estratto e ripetere il test, oppure testare il campione con un kit ELISA appropriato (si ricorda che le strisce sono progettate per lo screening).

I tamponi ATP non sono specifici per gli allergeni, poiché rilevano ATP proveniente da tutte le fonti (compresi i microrganismi) senza distinguere tra allergeni e non allergeni. Inoltre, i livelli di ATP variano nei cibi e i limiti di rilevamento non sono sufficientemente sensibili per il monitoraggio degli allergeni. La US Food and Drug Administration richiede test specifici per le proteine, e i test ATP non sono ben correlati con i test specifici per allergeni.

La tecnologia utilizzata nei test ELISA e nei dispositivi a flusso laterale (LFD) si basa su anticorpi che riconoscono epitopi specifici degli allergeni. Inoltre, la composizione del tampone di estrazione può variare tra gli allergeni, il che significa che non esiste un kit unico in grado di rilevare tutti gli allergeni.

Tuttavia, ciò che puoi fare è concentrarti sulla validazione dell’allergene con il carico allergenico più elevato. Poiché gli allergeni sono proteine, il componente con il livello proteico più alto avrà il maggiore potenziale allergenico. Se due o più allergeni fanno parte di una formula, non è necessario validare la rimozione di tutti; puoi concentrare la validazione sull’allergene presente in maggiore quantità. Tuttavia, se gli allergeni sono presenti in forme diverse (ad esempio, uno è in pasta e l’altro in forma liquida), potrebbe essere necessario validare la rimozione di entrambi. Inoltre, ci sono alcuni allergeni noti per essere più "appiccicosi" su determinate superfici e quindi richiedere più cicli di pulizia.

Dovresti tamponare le aree "critiche", ovvero quelle zone (come angoli e punti nascosti) dove la pulizia è più difficile e gli allergeni potrebbero rimanere. Se un’ispezione visiva rivela che un’area non è pulita, dovrebbe essere effettuato un altro passo di pulizia prima di eseguire il tampone.

Non limitarti a tamponare solo le aree piane e lisce che sono facili da pulire. Concentrati maggiormente sulle superfici a contatto con il cibo che sono più difficili da pulire, come fessure e giunti. Inoltre, usa solo i tamponi forniti con ogni kit AgraStrip o il kit AgraQuant per tamponatura, poiché questi tamponi sono stati ampiamente convalidati e provati per funzionare correttamente. L’uso di tamponi più economici potrebbe non essere altrettanto efficace nel catturare allergeni dalle superfici delle attrezzature, e gli allergeni potrebbero non essere rilasciati dal tampone. A volte, per i tamponi economici vengono utilizzate scatole di cartone di latte riciclato, il che potrebbe causare falsi positivi per gli allergeni del latte.

In questi casi, la possibilità di testare l’acqua di risciacquo è anche una buona opzione.

L'articolo di Steve Taylor e Joseph Baumert, "Best Practices in Allergen Swabbing," pubblicato nella Food Safety Magazine (giugno/luglio 2013), offre ulteriori raccomandazioni su questo argomento. Per maggiori informazioni, visita: Food Safety Magazine.

Il metodo fornito nei kit di test è stato rigorosamente testato e convalidato. Le istruzioni indicano le condizioni ottimali per eseguire il test. Lo sviluppo del colore continuerà nel tempo e potrebbe generare un risultato non valido se non letto al momento corretto. Se desideri conservare il strip per i tuoi archivi, dovresti scattare una foto della zona del risultato immediatamente dopo il tempo richiesto oppure tagliare le aree del filtro e del tampone di imbibizione, conservando solo la zona del risultato dei strip.

Il glutine non è lo stesso del grano; piuttosto, è un complesso proteico presente in diversi cereali, tra cui il grano, la segale, l'orzo e alcune varietà di avena (a causa della contaminazione incrociata durante la lavorazione, piuttosto che per il contenuto intrinseco di glutine). Il glutine è composto da due gruppi principali di proteine: prolamine e gluteline. Nel grano, queste sono chiamate specificamente gliadine e glutenine.

I test ELISA per il glutine possono rilevare questo complesso proteico, ma a causa della natura dei test ELISA, in particolare degli anticorpi utilizzati in questi test, non è possibile distinguere se il glutine rilevato proviene dal grano, dalla segale o dall'orzo.

Ad esempio, confrontando i due anticorpi più usati nel rilevamento del glutine, si scopre che sono stati sviluppati contro epitopi diversi, ma entrambi mostrano cross-reattività. L'anticorpo G12 (incorporato nei nostri prodotti AgraStrip® e AgraQuant®) è stato sviluppato contro il 33-mer della gliadina del grano, ma presenta anche cross-reattività con la segale e l'orzo. Allo stesso modo, l'anticorpo R5 è stato sviluppato contro la secale della segale, ma presenta anche cross-reattività con il grano e l'orzo.

Ciò è dovuto alla complessa natura della composizione del glutine. Le prolamine (note come gliadina nel grano) sono la frazione solubile in alcol del glutine. Pertanto, le prolamine vengono estratte utilizzando miscele di alcol e acqua, come il propan-1-olo acquoso al 50% (v/v) o l'etanolo acquoso al 60-70% (v/v). Circa la metà delle prolamine è presente come monomeri, ma l'altra metà è presente in polimeri che non sono solubili nelle miscele alcoliche-acquose. Per ridurre i legami disolfuro tra i polimeri delle prolamine, vengono utilizzati agenti riducenti come il 2-mercaptoetanolo (2-ME) o il ditiotreitolo (DTT), spesso in combinazione con il trattamento termico.

Se sei andato di recente in un negozio di alimentari, hai probabilmente visto etichette con: “Può contenere [alimento allergenico]” o “Prodotto in strutture dove è stato lavorato [alimento allergenico]”. Ma cosa c'è dietro un'etichetta "può contenere"? Le PAL, come quelle descritte sopra, vengono utilizzate per indicare la possibile presenza di allergeni a causa di contaminazioni incrociate. Dovrebbero essere basate su una valutazione del rischio approfondita e non utilizzate come sostituto delle Buone Pratiche di Produzione. Purtroppo, questo non è sempre il modo in cui vengono utilizzate al momento. Leggi di più sulle etichette di allergeni precauzionali qui.

Un'etichettatura accurata, basata su dati scientifici, aiuta a informare i consumatori in modo onesto sulle loro opzioni e a costruire la fiducia nel marchio. Le etichette non dovrebbero essere fuorvianti, ambigue o confuse, e dovrebbero evitare di elencare ogni possibile allergene, poiché ciò potrebbe essere percepito come un approccio eccessivamente protettivo e poco utile.

Le modifiche proposte includono:

• Rimozione di alcuni allergeni (soia, noci del Brasile, noci macadamia, pinoli e avena) dalla lista globale degli allergeni prioritari.
• Inclusione del sesamo come allergene prioritario globale.
• Monitoraggio attivo degli allergeni emergenti (come il kiwi, le proteine degli insetti) per una possibile inclusione.
• Definizione di dosi di riferimento per gli allergeni per supportare la gestione degli allergeni e le decisioni relative all'etichettatura.
• Sviluppo di un quadro normativo per l'Etichettatura Precauzionale degli Allergeni (PAL).

L'obbligo di etichettare la soia dipenderà dalle normative regionali, poiché è stata spostata nella lista secondaria degli allergeni prioritari. Tuttavia, il sesamo dovrà probabilmente essere incluso nell'etichettatura degli allergeni nei paesi membri dell'Organizzazione Mondiale del Commercio (OMC), poiché è stato aggiunto alla lista globale degli allergeni prioritari.

Ad oggi, nel 2024, l'implementazione del PAL non è obbligatoria. Un quadro normativo proposto per il PAL nel CODEX Alimentarius è in fase di sviluppo, con l'obiettivo di adottare un approccio più standardizzato e basato sulla valutazione del rischio. L'implementazione del PAL dipenderà dal completamento di questo quadro e dalle normative successive. Tra le altre cose, questo quadro prevede l'uso di un simbolo sulle etichette dei prodotti alimentari, che indica che è stato implementato e utilizzato un piano di gestione del rischio allergenico prima di determinare la necessità di un PAL per quei prodotti.

No, le linee guida proposte sconsigliano l'uso del PAL se i livelli di allergeni non superano i livelli di intervento. Questo approccio serve a prevenire l'uso eccessivo del PAL e a garantire che venga applicato solo sulla base di una corretta valutazione del rischio allergenico.

No, i livelli di soglia sono destinati a determinare la necessità del PAL e non devono essere utilizzati come criterio per le etichette "senza allergeni". Tali affermazioni richiedono l'adesione a standard specifici per garantire la sicurezza e la validità della dichiarazione.

La gestione degli allergeni alimentari comprende tutte le pratiche e le misure documentate che mirano a identificare, minimizzare, controllare o eliminare la presenza di allergeni a tutti i livelli di un'azienda coinvolta nella catena di approvvigionamento alimentare. È fondamentale per garantire la sicurezza dei consumatori, mantenere la fiducia nel proprio marchio e rispettare le dichiarazioni obbligatorie sul contenuto di allergeni nei prodotti alimentari.

Le aziende dovrebbero concentrarsi su una chiara identificazione e sull'evitamento del contatto incrociato. Questo include:

• Lavorare con i fornitori che hanno piani di gestione degli allergeni e certificazioni di sicurezza alimentare pertinenti, se necessario.
• Richiedere il certificato di analisi delle materie prime in arrivo.
• Prelevare campioni delle materie prime al momento della ricezione per verificare lo stato degli allergeni.
• Mantenere i materiali allergenici sigillati e chiaramente contrassegnati.
• Conservare i materiali in aree isolate o chiaramente demarcate.
• Conservare i materiali allergenici a livello del pavimento per evitare la contaminazione incrociata causata da eventuali perdite o fuoriuscite.
• Implementare misure appropriate in base alla natura dei materiali (liquido, polvere, granuli, ecc.).
• Gestire i materiali allergenici con abbigliamento e utensili dedicati.

Le pratiche raccomandate includono:

• Integrare la gestione degli allergeni nel sistema HAPPC (Hazard Analysis and Critical Control Points) del processo di produzione, prestando particolare attenzione ai punti di rischio di contaminazione.
• Utilizzare locali o linee di produzione dedicate per i prodotti con profili allergenici definiti.
• Implementare programmi di segregazione efficaci e programmi di pulizia convalidati. Questo include anche la segregazione temporale (pianificazione).
• Assicurarsi che tutti gli ingredienti trattati corrispondano a quelli elencati nella ricetta.
• Garantire che i prodotti corrispondano al loro confezionamento e etichettatura.
• Verificare regolarmente l'efficacia del piano di gestione degli allergeni.

Se un cambiamento di prodotto introduce nuovi allergeni, rivaluti il rischio di allergeni in base al piano di gestione. Comunichi chiaramente questi cambiamenti ai consumatori, ad esempio con etichette come "ora contiene..." o "nuova ricetta", e si assicuri che i vecchi materiali di confezionamento vengano rimossi e distrutti per evitare confusione.

La pulizia è fondamentale nella gestione degli allergeni. È importante convalidare e testare regolarmente l'efficacia dei metodi di pulizia, utilizzando metodi analitici specifici per gli allergeni. Utilizzare materiali di pulizia a scopo unico, adattare i layout per facilitare la pulizia e preferire i metodi di pulizia umida rispetto a quelli asciutti per ridurre al minimo il rischio di contaminazione incrociata.

La convalida della pulizia è fondamentale nella gestione degli allergeni in quanto garantisce che le procedure di pulizia riducano efficacemente gli allergeni a livelli accettabili. Questo è un componente chiave di qualsiasi programma di controllo degli allergeni, contribuendo a prevenire la contaminazione incrociata e a garantire la sicurezza del consumatore.

I passaggi chiave includono:

1. Determinare l'obiettivo della pulizia, concentrandosi sulla rimozione degli allergeni.
2. Garantire il supporto organizzativo e un approccio di squadra interdipartimentale.
3. Esaminare il design igienico delle attrezzature e la disposizione del pavimento per identificare le aree difficili da pulire.
4. Rivedere i programmi di pulizia esistenti e le normative applicabili.
5. Determinare lo scenario peggiore per l'inquinamento.
6. Scegliere i test analitici appropriati per la convalida, come ELISA e LFD.

La verifica, per definizione, è il processo che garantisce che la convalida rimanga applicabile. Comporta un monitoraggio continuo della convalida e dovrebbe avvenire a una frequenza stabilita nel corso di un determinato periodo di tempo. La verifica è spesso una forma ridotta di monitoraggio rispetto alla convalida, finalizzata a garantire che nulla nel programma di gestione degli allergeni sia cambiato nel tempo.

La verifica può essere eseguita tramite test ambientali di tamponi e acque di risciacquo e può anche includere test sui prodotti finiti in modo specifico. Per la verifica, si raccomanda l'uso di kit di test a dispositivo a flusso laterale. Un test qualitativo di presenza/assenza è sufficiente per monitorare continuamente il programma di allergeni e garantire che nessun allergene sia entrato nei sistemi.

Se qualcosa nel processo cambia nel tempo - sia un fornitore, un agente sanificante o qualcosa all'interno dell'impianto - è importante riesaminare la convalida per garantire che lo schema di verifica rimanga efficace e conforme.

Un programma di convalida della pulizia deve essere adattato alle esigenze specifiche di un ambiente di produzione. Ciò comporta la comprensione dei prodotti, delle linee di produzione e dell'efficacia dei programmi di pulizia attuali e precedenti. Il metodo di convalida scelto dovrebbe essere abbastanza solido da soddisfare sia i requisiti interni che gli standard degli enti di accreditamento esterni.